蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量; 为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量; 为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。
常用的蛋白定量方法对比
方法 |
吸收波长 |
原理 |
检测灵敏 |
时间 |
优点 |
缺点 |
分光光度计 |
280 nm |
络氨酸和色氨酸吸 |
50~100 |
快速 |
样本量小,快速, |
不兼容去污剂和 |
收光 |
μg |
5~10 min |
成本低 |
变性剂,变异高 |
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BCA |
562 nm |
铜还原,BCA与Cu2+反应 |
1~10 μg |
中速10~20 min |
兼容去污剂和变性剂,变异低 |
低或不兼容还原剂 |
Bradford |
595 nm |
考马斯亮蓝染料与蛋白质形成复合物 |
1~5 μg |
快速5~15 min |
兼容还原剂,快速 |
低兼容去污剂 |
Lowry |
750 nm |
蛋白质还原铜,铜-蛋白质复合物还原Folin-Ciocalteu |
~5 μg |
慢速40~60 min |
高灵敏度和准确性 |
不兼容去污剂和还原剂,过程长 |
BCA法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测试方法。
BCA法:蛋白在碱性条件下将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA形成稳定的紫色络合物,在562 nm处有最大吸光值,该络合物的颜色深浅与蛋白浓度成正比,通过与标准曲线对比,测得蛋白含量。
5981cc万洲国际在原有的技术(BCA蛋白浓度测试试剂盒)上进行优化升级,开发出极具性价比、极具性能优势的即用型BCA检测试剂盒,更快(省时间)更好(质优价宜)的为用户节省时间与金钱成本。
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方便快捷:提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤。
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速度快:比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
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线性范围广:20-2000 μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
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兼容性好:不受大部分样品中的化学物质的影响。
加速稳定性测试:
37℃放置1周,标曲线性良好。
反复冻融测试:
反复冻融15次对蛋白浓度无影响。
另外,我司亦提供可供客户根据本身需求制作标准品浓度的增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒(Cat#20201ES,灵敏度高:最小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/mL)、高兼容还原剂的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(Cat#20202ES,比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM)
货号 |
20200ES |
20201ES |
20202ES |
产品名称 |
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方法 |
BCA |
BCA |
Bradford |
兼容去污剂 |
高 |
高 |
低 |
兼容还原剂 |
低 |
低 |
高 |
产品组成(以500T为例) |
BCA试剂A 100 mL |
BCA试剂A 100 mL |
Bradford蛋白染色液 125 mL 蛋白标准品BSA(5×1 mL(2 mg/mL)) |
BCA试剂B 3 mL |
BCA试剂B 3 mL |
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蛋白标准品BSA(8个浓度,各1.5 mL) |
蛋白标准品BSA(5×1 mL(2 mg/mL)) |
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BSA标准晶体系 |
8个浓度(2000、1500、1000、750、500、250、125、0 μg/mL),各1.5 mL,即开即用,省去繁琐的稀释步骤 |
按说明书建议或客户需求自行配置BSA标准品(一般至少8个),准确度高 |
按说明书建议或客户需求自行配置BSA标准品(一般至少8个),准确度高 |
提醒:用RIPA裂解液(Cat# 20101ES / 20114ES / 20115ES / 20118ES )裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford蛋白浓度测试试剂盒(Cat#20202ES)法测定其蛋白浓度。可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒(即用型Cat#20200ES,增强型Cat#20201ES)测定其蛋白浓度。
产品名称 |
货号 |
规格 |
BCA Protein Quantification Kit(Ready to use) |
500 T |
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BCA Protein Quantification Kit |
500 T/2500T/ 5000T |
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Bradford Protein Quantification Kit |
500 T/2500 T |
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Bovine Serum Albumin Standard |
10 mL/50 mL |
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RIPA lysis buffer(strong) RIPA裂解液(强) |
100 mL |
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RIPA lysis buffer(Weak) RIPA裂解液(弱) |
100 mL |
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RIPA Lysis Buffer(Medium) RIPA裂解液(中) |
100 mL |
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Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 |
100 mL |