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Exosome RNA Isolation Kit 外泌体RNA分离试剂盒
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产品介绍

5981cc万洲国际外泌体RNA分离试剂盒采用酚/胍盐方法提取已分离的外泌体中总RNA(含有miRNA),可高效释放经超速离心、化学沉淀、免疫捕获或分子排阻法等不同方法所得外泌体中的RNA,通过核酸特异吸附柱可方便、快捷地纯化和洗脱外泌体RNA,所得外泌体RNA能够直接用于下游应用,如 RT-qPCR,Northern blot,芯片表达谱,NGS测序等。

产品特色

该产品通过核酸特异吸附柱可方便、快捷地纯化和洗脱外泌体RNA。

应用案例
组分编号组分名称41229ES3041229ES50保存条件
41229-A裂解液 A (Lysis buffer A)6 mL10 mLRT
41229-B裂解液 B(Lysis buffer B)6 mL10 mLRT
41229-C裂解液 C(Lysis buffer C)6 mL10 mLRT
41229-D洗涤液 W (Washing buffer W)30 mL50 mLRT
41229-E洗脱液 E (Elution buffer E)3 mL5 mL2-8℃
41229-F吸附柱(Spin Columns)/收集管(Collection Tubes 2.0mL)30套50套RT
41229-G1.5ml 离心管(Centrifuge Tubes 1.5 ml)30个50个RT

使用说明

1. 外泌体RNA释放

取200 μL分离的外泌体溶液,加入等体积(200 μL)的裂解液A,涡旋振荡30 sec,室温放置5 min,使外泌体充分裂解。

2. 外泌体RNA分离

加入200 μL裂解液B,盖好管盖,剧烈振荡15 sec,室温放置5 min。然后加入200 μL裂解液C,盖好管盖,剧烈振荡15 sec,室温放置5 min。4℃,12,000×g 离心 15 min,样品会分成三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相,RNA主要在水相中(上层),把水相转移到吸附柱中(避免吸取中间层),进行下一步操作。

3. 外泌体RNA洗涤

3.1 上清于吸附柱中静置5 min,4℃ 8,000×g 离心2 min,倒掉离心管中的液体。

3.2 取500 μL洗涤液W加入到纯化柱中,静置5 min后4℃ 8,000×g 离心2 min,倒掉离心管中的液体。

3.3 空柱4℃ 12,000×g 再离心2 min,去除残余液体,丢弃收集管,将吸附柱转入1.5 mL 离心管中(试剂盒提供)。打开吸附柱盖子,将吸附柱置于室温放置数分钟(5-10 min),以彻底晾干吸附材料中残余的洗涤液。

4. 外泌体RNA洗脱

向吸附柱中间位置悬空滴加50 μL洗脱液E,室温放置2-5 min,4℃ 12,000×g离心2 min,将溶液收集到离心管中。

存储条件

冰袋运输,2-8℃保存(按照试剂盒成分分别保存),有效期1年。

FAQ

Q1:提取外泌体RNA时,需要在什么温度下离心?

A:所有离心在4° C条件下离心。

Q2:为什么提取的外泌体RNA A260/280比值低于2.0 ?

A:大部分外泌体RNA是小RNA,且浓度很低,RNA的A260/280比值会随RNA浓度降低而降低,正常A260/280比值在1-1.6之间,低的A260/280比值不会影响下游应用。

Q3:提取的外泌体RNA下游应用时,如RT-PCR不是很好?

A:洗脱的外泌体RNA中含有乙醇和/或有较多盐离子污染,会抑制PCR反应。因此在最后洗涤时,将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的洗涤液。

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